真菌磷酸化蛋白提取試劑盒

簡要描述：產品概述 product description 磷酸化是細胞信號傳遞系統的組成部分,在許多生命活動中扮演重要角色,如基因與代謝活動的調節,細胞分化,腫瘤形成,細胞周期現象,由生長因子和激素激發的信號傳遞等。貝博® BBproExtra® 真菌磷酸化蛋白提取試劑盒適用于從各種真菌細胞和實體組織中提取磷酸化蛋白。提取過程簡單方便，可在1小時內完成。本試劑盒含有的蛋白酶抑制劑混合物，阻止了蛋白酶對蛋白的降解，為提取高純度的蛋白提供了保證。本試劑盒提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白質電泳、免疫沉淀、ELISA、轉錄活性分析、Gel shift凝膠阻滯實驗、酶活性測定等下游蛋白研究實驗。本試劑盒提取的蛋白為具有天然蛋白構象的活性蛋白。

產品型號：
廠商性質：生產廠家
更新時間：2025-01-10
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產品分類

CLASSIFICATION

蛋白質生物學

蛋白提取和裂解細胞器分離蛋白純化蛋白質濃縮和緩沖液置換蛋白定量蛋白凝膠電泳免疫組織化學查看全部產品

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詳細介紹

保存溫度

2-8℃

注意事項

1.蛋白酶抑制劑未開蓋使用前也可以2-8℃儲存。開蓋使用后-20℃儲存。
2.蛋白酶抑制劑在2-8℃低溫時是固體狀態，從冰箱取出后恢復至室溫或37℃短時間水浴，變成液體狀態后離心至管底部再開蓋。
3.試劑拆封后請盡快使用完！

有效期

一年

檢測方法

磷酸化蛋白質譜,2-D,IEF,
WB,IP,EMSA等

適用樣本

真菌

產品特點

1.使用方便，從細胞，組織中提取蛋白不需經過研磨、反復凍融、超聲破碎等前處理。
2.將蛋白提取的時間縮短至30分鐘-1小時。
3.含蛋白穩定劑，提取的蛋白穩定。
4.紫外檢測蛋白濃度時，背景干擾低。
5.蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制劑配方優化。蛋白酶抑制劑混合物包含7種獨立的蛋白酶抑制劑；每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性。該混合物優化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性，包括蛋白酶、半酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。

產品應用

磷酸化蛋白質譜,2-D,IEF,
WB,IP,EMSA等

儀器準備

1.離心機
2.振蕩器
3.勻漿機/勻漿器
4.渦旋混勻器
5.移液器
6.冰箱
7.冰盒

試劑準備

1.PBS緩沖液
2.蛋白定量試劑盒

耗材準備

1.離心管
2.吸頭
3.一次性手套

使用注意事項

使用注意事項：
? 旋帽離心管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋內壁上的液體甩至管底，避免開蓋時液體灑落。
? 實驗過程中的所有試劑須預冷；所有器具須放-20℃冰箱預冷。整個過程須保持樣品處于低溫。
? 蛋白酶抑制劑儲存期間溶液如果出現沉淀，不影響使用，溶解后正常使用。

使用方法

新鮮樣本：
1. 提取液準備：
每500 μl冷的提取液A中加入2 μl蛋白酶抑制劑混合物，混勻后置冰上備用。
2. 取清洗干凈的100-200 mg新鮮真菌組織/細胞樣本用刀盡可能剪碎，加入500 μl提取液A后用勻漿機/勻漿器充分勻漿。
3. 將勻漿液吸入一個預冷的干凈離心管中在4℃振蕩30分鐘-1小時。
4. 在4℃，12000×g條件下離心10-15分鐘。
5. 將上清吸入另一預冷的干凈離心管，即可得到真菌蛋白。
6. 上述蛋白提取物請分裝后于-80℃冰箱保存備用或直接用于下游實驗。

凍存樣本：
1. 凍存樣本參照上述樣本步驟操作。
2. 凍存樣本中直接加入5-10倍體積的蛋白提取液，振蕩30分鐘。
3. 在4℃，12000×g條件下離心15分鐘。
4. 將上清吸入另一預冷的干凈離心管，即可得到總蛋白。
5. 上述蛋白提取物請分裝后于-80℃冰箱保存備用或直接用于下游實驗。

常見問題分析

1.蛋白濃度低？
處理部分組織樣本時可能沒有裂解，導致蛋白濃度低。只要適當延長試劑A的處理時間即可。在持續振蕩的條件下處理，沒有振蕩器也可間隔幾分鐘用吸頭吹打混勻。

2.用什么方法定量蛋白？
建議用BCA法。不適合用Bradford法，因為試劑A中含有干擾Bradford法的組份，導致定量不準。如果已經進行過透析處理或者用脫鹽柱改換過緩沖體系，則可以用Bradford法定量。

參考文獻

1.Na Zhao, Xinyue Xu, Yashitola Wamboldt, Sally A. Mackenzie, et al.
MutS HOMOLOG1 silencing mediates ORF220 substoichiometric shifting and causes male sterility in Brassica juncea
Journal of Experimental Botany 2016 67 (1): 435-444. （IF=5.677）

2.XiaokangLi, LiMu, DandanLi, et al.
Effects of the size and oxidation of graphene oxide on crop quality and specific molecular pathways
Carbon 2018 （IF=7.082）

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